ELISA，即酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)，是在免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种重要免疫酶技术。成功的ELISA方法开发的关键在于选择与搭配合适的试剂耗材。了解各类试剂的特性和多样性，有助于针对不同实验需求制定高质量的ELISA方案。

一、酶标板材

市场上普遍使用的酶标板材大多由多（C8H8）n组成。具备丰富产品线的公司会根据不同化学修饰，提供与待包被蛋白特性相匹配的板材。一般情况下，酶标板材会根据高结合力（High binding）和中结合力（Medium binding）进行分类。然而，根据笔者多年经验，亲水性、弱亲水性、未处理和疏水性四个等级的划分，更能真实反映酶标板材的特点。通常，亲水板材对蛋白的结合力较强，疏水板材则较弱，这会影响蛋白的固定。在相同浓度下，亲水板材可固定更多蛋白，例如，亲水板材最大吸附抗体量可达220ng，而疏水板材仅为100ng。同时，随着亲水性降低，可能导致非特异性的信号增加。因此，多样化的酶标板材选择是专注于ELISA方法开发实验室的重要准备。

二、包被液

常用的包被液包括PBS（pH 7.4）和碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6）。包被条件，如pH和离子浓度，会对包被效率产生显著影响，因此需要分析待包被蛋白的特性。有研究指出，通过抽真空处理，能够使包被蛋白更高效地吸附于酶标板材上。

三、封闭剂

常见的封闭剂有3% BSA（w/v）和5%脱脂奶粉（w/v）。封闭剂的作用是阻挡非特异性结合，然而其效果在对待成分复杂的样品时可能显著减弱。研究表明，封闭剂的效力与分子大小成反比。在无法获得理想封闭效果时，选择分子量较小的封闭剂（如酪蛋白）可能会更为有效。特别警告：在生物素-链霉亲和素体系下，切勿使用脱脂奶粉作为封闭剂，因为其含有生物素，可能导致干扰。

四、洗涤液/稀释液

洗涤液常采用中性缓冲液加一定浓度的去污剂，如PBST（0.05% Tween-20 in PBS）。稀释液中通常会加入封闭剂成分，如0.5% BSA（w/v）in PBST。在一些体内样品检测过程中，常添加一定浓度的阴性血清，使不同稀释度样品保持一致的非特异性背景。

五、酶联抗体

酶联抗体的种类繁多，可分为特异性和通用型酶联抗体。特异性酶联抗体针对特定蛋白表位，而通用型酶联抗体则对多肽序列、标签及抗体的Fc端保守区域等有反应。常用的酶标记主要包括AP（碱性磷酸酶）和HRP（辣根过氧化氢酶）。根据抗体的组成，酶联抗体可分为单抗和多抗，尤其需要注意多抗可能存在的交叉反应。酶联抗体也是根据分子量的大小划分，分子量越小的抗体越可能避免结合时发生空间阻碍，但同时也增加了与板材非特异结合的风险。

六、显色液和酶标仪

显色液的选择应与所使用的酶联抗体相匹配，并兼顾实验室现有的酶标仪。如HRP标记的酶联抗体可选用TMB显色液，适配吸光度读数的酶标仪；或选择Ampliflu™ Red适合荧光读数的仪器；亦或是QuantaRed ADHP适合化学发光读数的系统。通常ELISA方法的灵敏度受到底物检测方法的制约，其中化学发光底物的信号下限优于荧光底物，而后者又优于吸光度底物。即使是常用的TMB显色液，也应根据具体的实验开发情况选择不同强度的显色液，以获得最佳效果。

总之，使用鸿运国际的产品能够在ELISA的各个环节提升实验效率与准确性，为您的研究提供强有力的支持。选择合适的试剂和条件，以实现高质量的实验结果，将使您在生物医疗领域更具竞争力。