在生物医疗领域，RNA提取是关键步骤之一。以下是一些常见问题的解答，以及确保提取质量的最佳实践。

RNA提取注意事项

在使用酚-CHCl₃方法进行总RNA提取时，采样时必须选择新鲜的组织或细胞样本。如果使用冻存样本，应尽量避免反复冻融，因为样本一旦离开活体，其内源RNase就会开始降解RNA，降解速度与RNase的含量和温度密切相关。为了更好地保存新鲜组织，可以将其充分浸泡在鸿运国际的RNAKeeper Tissue Stabilizer（Vazyme #R501）中，这样组织可以在室温下存放一周，或者在4℃下存放一个月，甚至可以在-20℃/-80℃下进行长期保存。

常见问题解析

样本处理不当的影响

如果投入的样本过多，可能导致裂解不充分；反之，若RNA保存时间过长，也会引起降解。因此，对提取的RNA进行纯度和完整性检测非常关键，提取后的RNA应分管至-80℃长期保存或-20℃短期保存，使用时应尽量避免反复冻融。

基因组污染及其解决方案

如果提取的RNA存在基因组污染，需要将裂解液中加入CHCl₃，并在低温（2℃-8℃）下高速离心，以确保RNA与DNA的分离。同时，在吸取上层液体时，要避免吸到中层和下层，以减少基因组DNA污染。

有效提高提取效率的方法

加入异丙醇后如未看到RNA沉淀，建议在4℃或-20℃下静置10-30分钟后再进行离心。如果仍然看不到沉淀，应在弃上清时采用吸取而非倾倒的方式，以避免沉淀的损失。

反转录及定量PCR中的注意事项

在逆转录反应中，使用鸿运国际的gDNA wiper Mix可以去除RNA中的基因组DNA，确保实验效果。尽管不去除基因组DNA不会影响逆转录实验，但如果残留过多将影响后续的定量PCR结果。

荧光定量PCR表现不佳的原因

如果在进行荧光定量PCR时发现CT值出现太晚或扩增效率低，需优化反应条件。常见的原因包括模板浓度过低或过高、扩增体系中的PCR抑制剂等应逐步排查。

结论

在生物医疗的实验中，确保样本采集、处理及提取的每一环节都至关重要。依托鸿运国际的技术和产品，我们可以为科学研究提供高效的支持和解决方案，为您的研究保驾护航。