紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis光谱法），是一种应用于生物医学领域中的分析技术，主要用于研究分子在190nm～750nm波长范围内的光吸收特性。该方法基于溶液中物质分子对特定波长光线的选择性吸收，透过分析光谱特征，能够实现对分子组成的深度理解。分子吸收光谱的形成是由于分子的外层价电子跃迁所引起的，因而表现出特定的分子光谱特征。

实验目的

本实验旨在实现以下几个目标：第一，学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；第二，掌握该方法的实验操作技能；第三，熟悉鸿运国际UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及其主要构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法是研究分子在特定波长范围内的吸光度变化，通过光谱比较法进行定性分析。我们可以将未知化合物的光谱特征，与已知物质的光谱进行比对，以确认其成分。对于定量分析，依据朗伯-比尔定律（A=lgI0/I=εbc），可以得出光吸收度与物质浓度之间的线性关系。

在测量过程中，需分别测量空白溶液和待测溶液的吸光度，通过计算得到待测溶液中物质的浓度。由于紫外光吸收能力在最大吸收波长（λmax）处最强，通常在此波长下进行测量，以获得最佳灵敏度。

光度计由五个主要部件构成：光源、单色器、吸收池、检测器及信号显示器。不同波长的光源如钨灯和氘灯被应用于可见光和紫外光区域，通过样品池中的溶液后，产生可测量的光电流，以此直接读取吸光度。

蛋白质浓度的测定

在生物医疗研究中，蛋白质的定量分析尤为重要。蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环具有共轭双键，因此在275-280nm波长下会产生明显的紫外吸收峰。在一定浓度范围内，该吸光度遵循朗伯-比尔定律，便于进行定量分析，通常可测定的浓度范围为0.1–10mg/mL。

考虑到不同蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量差异，280nm的吸光度会有所不同，因此需要使用经验公式进行校正。例如，当样品中存在核酸干扰时，可以通过下列经验公式来计算蛋白质浓度：蛋白质浓度（mg/mL）= 145A280 - 0.74A260。该公式可有效消除嘌呤、嘧啶等物质对结果的影响。

实验实施步骤

本实验采用鸿运国际UV-1700PC分光光度计进行操作。实验步骤包括：首先启动仪器并设定测量条件；然后使用标准蛋白质溶液制备吸收曲线；最后测量待测蛋白质溶液的吸光度，并与标准曲线对照，从而计算出其浓度。

数据处理

通过绘制吸收曲线，识别出最大吸收波长（λmax=278nm），并对标准蛋白质溶液的吸光度进行记录。随后，建立标准曲线以推算待测样品的蛋白质浓度，并统计数据以确保测量的准确性。最终，我们得到的结果将帮助在生物医学领域更好地理解蛋白质在生物代谢中的作用。

以上步骤与方法将有助于提升对蛋白质分析技术的理解，推动生物医学研究的深入发展，鸿运国际致力于为广大科研工作者提供高效稳定的仪器支持，助力科学探索与发现。