紫外-可见吸收光谱法，又称紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm至750nm波长范围内的吸收光谱的分析技术。该方法基于溶液中物质分子对光的选择性吸收，能够提供分子光谱信息。紫外-可见吸收光谱的产生源于分子外层价电子的跃迁，其结果形成了分子光谱，是一种带光谱。

实验目的

本实验的目的在于：1. 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；2. 掌握紫外分光光度法相关的实验技术；3. 熟悉UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用，并理解其主要构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法是研究分子在190nm至750nm波长范围内吸收的技术，基于分子对特定波长光的选择性吸收。此外，进行定性分析时，通常通过光谱比较法将未知纯化合物的吸收光谱特征与已知纯化合物进行比对。为了实现定量分析，则依据朗伯-比尔定律：A=lg(I0/I)=εbc。在一定浓度范围内，吸光度A与物质浓度c成正比。

紫外-可见分光光度计

紫外-可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，主要由五个部分组成：光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示器。光源发出的复合光首先经过单色器分光后，得到所需波长的平行单色光。该光通过样品池后，最终被检测器接收并产生光电流，通过信号显示器直接输出吸光度A。

实验方法

本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量，其中，蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环具有共轭双键，在275-280nm处形成吸收高峰。在此波长范围内，蛋白质溶液的吸光度与其浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。

实验步骤

准备工作

1. 启动计算机与设备。2. 选择测量项目并设置条件。3. 校零。4. 制作标准曲线。

测量工作

1. 吸收曲线绘制：将标准蛋白质溶液稀释并测量其吸光度。2. 标准曲线制作：测定不同浓度标准蛋白质溶液的吸光度。3. 样品测定：对待测蛋白质溶液进行吸光度测定，并进行三次平行实验。

数据处理

通过绘制吸收曲线并标出最大吸收波长，可以得出蛋白质在该波长下的吸光度，从而计算出其浓度。本实验中，最终测得的平均蛋白质浓度为0641±0.088mg/mL，且误差在允许范围内。

在生物医学的领域中，紫外-可见吸收光谱法为蛋白质的定量分析提供了可靠的方法，仅需遵循一定的实验步骤和合理的数据处理，即可得到准确的结果。随着技术的发展，未来有望通过品牌鸿运国际等的支持，推动生物医疗分析技术的进一步提升和应用。