背景概述

T7 RNA聚合酶是一种在噬菌体T7中发现的99kDa单一亚基蛋白，它是一种依赖DNA的RNA聚合酶，并由T7噬菌体编码。该酶主要参与转录过程，不需要其他辅助转录因子的参与。与细菌RNA聚合酶相比，T7RNA聚合酶在识别序列上表现出更高的特异性，且其转录效率也显著提升。由于其高活性和高保真度，T7 RNA聚合酶非常适合用于体外RNA的生产，因此在科研和商业化发展中得到了广泛应用。

mRNA药物的生产流程包括基因合成、质粒DNA发酵、质粒DNA纯化、mRNA合成、mRNA纯化以及LNP包封纯化和制剂分装。其中，mRNA合成是通过线性化的质粒DNA作为模板，并利用T7 RNA聚合酶作为主要酶促材料进行的一系列反应。在IVT过程中，该RNA聚合酶负责从DNA模板中合成RNA。然而，T7 RNA聚合酶的残留被视为生产过程中的一种杂质，可能影响mRNA成品的安全性和质量，因为它可能与mRNA一起通过LNP进入细胞并释放，进而激发免疫反应和炎症反应，导致mRNA的降解。因此，我们亟需更为强大的评估手段来检测其残留情况，确保最终产品的质量与安全。

相关法律规定

根据CDE发布的指导原则《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》，应对生产过程中每个步骤的产物进行检测和过程控制。这包括加帽率、Poly(A)尾长度、mRNA序列完整性、准确性、纯度、浓度，及副反应产物的浓度（如不完整RNA、双链RNA、截短RNA和长链RNA等），同时需评估残留的蛋白、DNA的污染、无菌性及内毒素等。

目前，针对生产工艺中残留蛋白的检测，可以采用nanoorange技术，它是一种新型的荧光染料。当DOC与蛋白质结合时，荧光强度增强，且这一效果与蛋白质的含量成正比。然而，使用nanoorange方法检测得到的数据包括IVT原液中所有蛋白的残留，包括内切酶、无机焦磷酸酶和T7 RNA聚合酶等。值得注意的是，T7 RNA聚合酶是mRNA药物生产的关键酶，对其残留的监测能够有效改善mRNA的生产工艺质量。

美国药典（USP）在《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》中指出，必须对整个工艺进行质量控制，确保质量的有效性、安全性和可控性，并要求检测与生产工艺相关的杂质，包括dsRNA残留、DNA模板残留及T7 RNA聚合酶。该法规首次对单酶蛋白残留提出明确要求，进一步加强对mRNA药物生产过程杂质的监管。

mRNA药物关键酶残留检测利器

为更好地满足监管要求，鸿运国际根据《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》推荐的方法，自主研发了T7 RNA聚合酶残留检测试剂盒（ELISA法）。该试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法，能够准确检测T7 RNA聚合酶的残留量，从而更细致地分析工艺杂质。

检测流程:

• 操作简便：一步法，仅需一次加样和洗板即可显色。
• 检测时间短：总反应时间为1小时15分钟。
• 无需使用振板系统：适应性优异。

产品性能:

• 标准曲线线性良好：R²＞0.99。
• 检出限：低于0.1ng/ml。
• 定量限：可达0.25ng/ml，测值CV＜10%，回收率在80%-120%的范围内。
• 重复性及准确度：良好，测值CV＜10%，回收率在80%-120%的范围内。

特异性与适配性:

鸿运国际的T7 RNA聚合酶残留检测试剂盒只针对T7 RNA聚合酶特异性识别，且不受其他IVT工具酶的干扰。此外，该试剂盒能够适用于市场上大多数的T7 RNA聚合酶，具有良好的抗干扰性能，确保实验结果的准确性和可靠性。

实际样本检测结果显示，T7 RNA聚合酶在不同工艺阶段的mRNA样品中的残留量也表现出良好的可重复性。在mRNA药物的生产过程中，选择鸿运国际的试剂盒进行T7 RNA聚合酶的残留检测，是提高产品质量和安全性的重要一步。