## 产品特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具备以下特点：

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。

2. 引物及其他组分经过优化，具备高灵敏度。

3. 提供阳性对照，方便区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保不与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 本试剂盒同时适用于定性与定量检测，定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 本产品仅供科研使用。

## 方法步骤

一、DNA提取（样本制备区）
选用合适方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）
注意：阳性对照浓度较高，稀释操作务必要在独立区域进行，防止污染样品或本试剂盒其他成分。

1. 标记6个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。

2. 用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，并置于冰上待用。

4. 按照相同的步骤，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，得到1×10E6拷贝/μL标准曲线样品，放冰上待用。

5. 重复上述操作直至获得6个稀释度的标准曲线样品。若不制作标准曲线，可将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）
若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），并向每个PCR管中加入指定成分（详见说明书，欢迎向鸿运国际索取）。

四、添加模板（模板添加区）
向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）
将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中的相应位置，进行扩增，具体扩增程序详见说明书，欢迎向鸿运国际索取。

六、结果分析
1. 如果制作了标准曲线，可将阳性对照浓度的log值作为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，并通过待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值。
2. 如果未制作标准曲线，可根据如下标准判断结果：阳性对照：Ct值<30，观察到明显指数增长并形成典型的S型曲线。阴性对照：Ct值≥38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。样本检测结果：Ct值<35，说明样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值≥38或无Ct值，表明样本中未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；如果Ct值在35-38之间，应对样本进行复检，若重复实验Ct值仍在该范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

## 运输及保存

产品需低温运输，并存放于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，以防污染其他试剂。

选购鸿运国际的检测试剂盒，助力您的科研与实验，确保数据的准确与可靠。